蛋白质相互作用分析

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蛋白相互作用是指两个及以上的蛋白质分子结合形成蛋白质复合体的一个过程。一般情况下蛋白质很难单独发挥作用，都是由多个蛋白质分子的相互协调共同实现复杂的细胞功能。因此专注于蛋白相互作用的研究更加利于探索疾病的发生发展、找寻特定的疾病预测治疗方法，并且在新药研发的研究方面提供新的思路。蛋白质互作分析的方法较多，百泰派克提供蛋白质互作分析服务，及后续基于液质联用技术（LC-MS/MS）对IP、Co-IP样品及GST融合蛋白Pull-down等纯化样本中的蛋白/蛋白混合物的质谱鉴定分析服务。

1，免疫共沉淀法（CO-IP）蛋白质相互作用分析
免疫共沉淀法（CO-IP）利用抗原抗体之间的特异性来检测蛋白质之间的生理性相互作用的一种方式。首先在实验中为了最大限度的保留细胞中蛋白的相互作用，会使用非离子变性剂来裂解细胞。当细胞裂解时，细胞内的蛋白相互作用被保存下来，在其中加入相应的抗体，使抗体与细胞中的特异蛋白质结合，再加入蛋白A/G形成抗体蛋白复合物，进行离心、分离，使抗体蛋白复合物沉淀，弃去上清液，最后用质谱技术鉴定沉淀下来的蛋白质，进而证明两者间的相互作用。仅适用于分析稳定或者强烈的蛋白质间相互作用；通常用来鉴定某个目标蛋白质与另一个蛋白质之间相互作用或者被用来寻找与某个目标蛋白质存在相互作用的未知蛋白质。

百泰派克生物科技针对样品蛋白的提取，表达和纯化的优化方案可确保获得高质量的诱饵和猎物蛋白，为客户提供优质的Co-IP蛋白互作分析服务及对免疫共沉淀CO-IP获取的蛋白进行蛋白质谱分析。

• 优点：可分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合物；
• 缺点：灵敏度较低；不能进行亲和力低和瞬间的蛋白质相互作用分析检测。

2，GST融合蛋白pull-down沉降技术的蛋白质相互作用分析
GST融合蛋白pull-down沉降技术，利用基因重组将带有GST标签的载体插入到目标蛋白A上，谷胱甘肽包裹的磁珠与目标融合蛋白结合，加入细胞裂解液后，具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附，加入过量的谷胱甘肽进行洗脱，最后用MS技术分析。这种方法主要是研究体外强烈或者稳定的蛋白质间相互作用；可以鉴定两种已知的感兴趣蛋白质可能存在的直接相互作用；寻找可能与目标蛋白存在相互作用关系的未知蛋白。

作为技术依托型的科研技术服务公司，百泰派克生物科技在蛋白互作分析服务及基于质谱的互作蛋白质质谱鉴定分析方面拥有多年经验。百泰派克提供基于GST pull-down蛋白互作分析服务，及Pull-down靶蛋白质谱鉴定服务。我们以严格的质量控制和较短的检测周期为特色，百泰派克向客户提供可定制的一站式服务，涵盖您项目中从基因合成到数据报告的每个步骤。

• 优点：可排除细胞内其他情况的干扰；可以直接检测蛋白质之间是否有相互作用；方法简单，操作方便。
• 缺点：在细胞外进行，不能准确的反应细胞内的蛋白质相互作用关系。

3，SILAC与免疫共沉淀质谱联用的蛋白互作分析
利用SILAC方法分别标记实验组和对照组细胞后进行Co-IP实验，依靠抗原与抗体之间的专一性反应分离得到免疫复合物；再通过LC-MS/MS来定性/定量检测免疫复合物中的蛋白；当实验组与对照组中某个蛋白质的含量达到统计学差异时，判定这个蛋白质与研究的蛋白具有相互作用，可极大降低蛋白质互作假阳性结果可能性。SILAC技术和Co-IP-MS技术结合可用于高通量定量分析在特定情况下蛋白的互作蛋白网。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台，Orbitrap Fusion质谱平台，Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供SILAC与免疫共沉淀质谱联用的蛋白互作分析服务技术包裹（SILAC-based CoIP-MS），您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的细胞寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括细胞培养、细胞标记、蛋白提取、抗体IP、效率检测、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。