基于SDS-PAGE的蛋白分离

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十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE）在蛋白表达分析等科研工作中经常用到。可用于获取蛋白质样品的电泳图谱，结合其它基于质谱的蛋白质鉴定服务对样品进行分析或纯化，用于复杂生物样品的蛋白质谱分析。

百泰派克生物科技可根据您的需求，提供基于1D SDS-PAGE或2D SDS-PAGE的蛋白分离服务：基于我司优化的标准操作流程，使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝胶系统进行1D SDS-PAGE蛋白质分离。将蛋白样品(5-20ug)用上样缓冲液稀释到一定浓度并加热（沸水浴5 min），根据样品的分析目的选择适当浓度的凝胶并将样品上样到凝胶孔中，加入电泳缓冲液，首先在80V电压下恒压分离15min，然后在120V电压下恒压分离60 min。分离后卸下胶板，将凝胶用考马斯亮蓝染色或银染染色。

2D SDS-PAGE分离蛋白质使用IPG（pH 3-10）胶进行一维等电点聚焦，SDS-PAGE胶二维电泳进行Mw分离，实现蛋白分离。样品首先使用超滤管进行纯化，并将溶液体系替换为2D lysis buffer (30 mM Tris- HCl, pH 8.8, containing 7 M urea, 2 M thiourea and 4% CHAPS)进行等电点聚焦。聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上，挤去多余水分、矿物油及多余样品，用缓冲液溶胀15 min后，将胶条继续在平衡缓冲液中平衡15 min。将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上，使用低熔点琼脂糖封胶后，将凝胶转移至电泳槽中，起始使用低电压，待样品在完全走出IPG胶条，浓缩成一条线后，加大电压，待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。卸下胶板，将凝胶用考马斯亮蓝染色、银染染色或荧光染色。使用Typhoon TRIO (GE Healthcare)对胶图进行扫描，扫描得到的胶图通过Image Quant software (version 6.0, GE Healthcare)和DeCyder 5.0 (GE Healthcare)进行分析。

关于样品：
1. 液体或固体样品均可。
2. 1D SDS-PAGE一般需要2-30µg蛋白，2D SDS-PAGE一般需要50-1000µg蛋白。
3. 考马斯亮蓝染色、银染染色或荧光染色的蛋白质均可。